应用Gibson Assembly法快速构建人组蛋白甲基化转移酶启动子荧光素酶报告载体

摘要：

目的：快速构建人组蛋白甲基转移酶(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)启动子荧光素酶报告载体并验证其活性。方法：因EZH2启动子富含GC，故应用Gibson Assembly方法设计分两段扩增，然后将片段一步法连入pGL3-Basic质粒，构建荧光素酶报告载体，进行酶切鉴定。与pRL-TK内参照质粒共转染C4-2细胞，双荧光素酶分析法检测启动子的活性。结果：经酶切鉴定证实成功构建了EZH2启动子报告载体，双荧光索酶报告基因检测结果显示构建的报告载体具有启动子活性。结论：快速成功构建了具有启动子活性的EZH2启动子荧光素酶报告载体，为进一步研究前列腺癌中EZH2表达调控机制提供必要的实验材料。

关键词：Gibson Assembly、报告载体、人组蛋白甲基转移酶、启动子活性

所属期刊栏目：36

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金81472776;教育部博士学科点专项科研基金20133201110016;江苏省自然科学基金BK20161222;苏州市科技计划项目SYS201629。This work was supported by the National Natural Science Foundations of China81472776;Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education20133201110016;the Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20161222;Suzhou Foundation for Development of Science and TechnologySYS201629;P. R. China

在线出版日期：2017-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1971-1974