磷酸化叉头框O4型在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

摘要：

目的:探讨磷酸化叉头框O4型（phosphorylated forkhead box subtype O4, p-FoxO4）在H9c2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）损伤过程中的作用。方法:H9c2细胞正常培养24 h后，均匀接种于6孔板中，密度为4.5×10
5个/ml，每组≥3次重复，按照随机数字表法分为4组：对照组（Control组）、缺氧1 h复氧1 h组（H1R1组）、缺氧1 h复氧3 h组（H1R3组）和缺氧1 h复氧6 h组（H1R6组）。采用细胞增殖-毒性检测法检测4组细胞相对存活率；实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR）法检测叉头框O4型（forkhead box subtype O4, FoxO4）、Bcl-2细胞死亡的相互作用介质（Bcl-2 interacting mediator of cell death, Bim）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl2-Associated X, Bax）的mRNA含量，以此确定最佳H/R时间点。Control组与H1R1组分别通过Hoechst染色检测细胞凋亡程度，Western blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax蛋白含量。将6~8周C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组（每组3只）：假手术组（sham组）、缺血30 min再灌注3 h组（R3组）、缺血30 min再灌注6 h组（R6组）、缺血30 min再灌注12 h组（R12组）、缺血30 min再灌注24 h组（R24组）。采用qPCR法检测结扎小鼠左前降支后导致缺血的左心室前壁的FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量。
结果:与Control组比较，H1R1组、H1R3组和H1R6组细胞相对生存率下降，H1R1组最低（
P<0.05）；与H1R1组比较，H1R3组和H1R6组细胞相对存活率升高（
P<0.05）；与H1R3组比较，H1R6组细胞相对存活率升高（
P<0.05）。与Control比较，H1R1组、H1R3组、H1R6组FoxO4 mRNA表达增加（
P<0.05），H1R1组Bim mRNA表达增加（
P<0.05），H1R1组Bcl-2 mRNA表达降低（
P<0.05），H1R1组Bax mRNA表达增加（
P<0.05），H1R3组、H1R6组Bax mRNA表达减少（
P<0.05）；与H1R1组比较，H1R3组、H1R6组Bim mRNA表达和Bax mRNA表达降低（
P<0.05）。与Sham组比较，R12组、R24组FoxO4 mRNA含量增加（
P<0.05），R6组Bim mRNA减少（
P<0.05），R24组Bim mRNA含量增加（
P<0.05），R3组、R12组、R24组Bcl-2 mRNA含量减少（
P<0.05）；R6组和R24组Bax mRNA含量增加（
P<0.05）；与R3组比较，R12组和R24组FoxO4 mRNA含量增加（
P<0.05），R12组和R24组Bim mRNA含量增加（
P<0.05），R6组、R12组和R24组Bax mRNA含量增加（
P<0.05）。与R6组比较，R12组和R24组FoxO4 mRNA含量及Bim mRNA含量增加（
P<0.05）；与R12组比较，R24组FoxO4 mRNA、Bim mRNA、Bax mRNA含量增加（
P<0.05）。与Control组比较，H1R1组出现较多核固缩、高亮的凋亡细胞，凋亡率差异有统计学意义（
P<0.05）。与Control组比较，H1R1组FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bax蛋白含量增高，Bcl-2蛋白含量降低（
P<0.05）。
结论:p-FoxO4可能通过调控细胞凋亡内在途径参与H9c2心肌细胞的H/R损伤。

关键词：缺氧/复氧损伤、磷酸化叉头框O4型、细胞凋亡

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资助基金：国家自然科学基金面上项目81873925，81671880;江苏省自然科学基金BK20191171;江苏省医学创新团队CXTDA2017043;苏州市重点病种项目LCZX201603;General Projects of National Natural Science Foundation of China81873925, 81671880;Jiangsu Natural Science FoundationBK20191171;Project of Jiangsu Provincial Medical Innovation TeamCXTDA2017043;Suzhou Key Disease ProgramLCZX201603

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：337-343