CD47胞外区蛋白多克隆抗体的制备

摘要：

目的:制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法:通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR，RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列，分别重组到原核表达载体pET32a(＋)和pET31b(＋)中，利用大肠杆菌表达CD47蛋白，并优化异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导蛋白表达工艺，表达出CD47蛋白。用纯化的CD47蛋白免疫Balb/c小鼠，获得小鼠多克隆抗体，使用亲和层析法纯化CD47多抗，并对多抗进行酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA )效价检测和Western blot特异性鉴定。结果:成功构建pET32a(＋)-CD47和pET31b(＋)-CD47重组质粒。按照实验设置不同条件诱导表达蛋白后，选出最佳表达载体pET32a(＋)-CD47。在大肠杆菌中获得表达最佳蛋白表达工艺。表达制备CD47蛋白，经过五次免疫后，得到CD47多抗。用ELISA法检测制备多抗的效价能达到1∶128 000。Western blot检测结果显示，自制的CD47多抗能准确检测出小鼠心脏组织样品。结论:成功制备了CD47胞外区蛋白多抗，为进一步研究CD47生物学功能奠定了基础。

关键词：CD47、胞外区蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：47

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：19-24