Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：

目的:制备Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白（hemagglutinin，HA）的特异性单克隆抗体，建立检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法:用Yamagata系乙型流感病毒（B/Phuket/3073/2013）抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体，建立一种检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果:该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔，检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔；该方法仅能与Yamagata系乙型流感病毒发生反应，具有较强特异性。灵敏度分析显示，该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2
-1 HAU/100 μL和1.22 ng/mL，具有较高灵敏度。重复性试验表明，该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。
结论:本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为Yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。

关键词：流感病毒B型、Yamagata系、病毒检测方法、ELISA、单克隆抗体、特异性

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资助基金：国家自然科学基金32273092;中央高校基本科研业务费2022ZFJH003;National Natural Science Foundation of China32273092;Fundamental Research Funds for the Central Universities2022ZFJH003

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：331-336