流感病毒血凝素茎部螺旋区和串联重复M2蛋白胞外区域融合蛋白的免疫效果研究

摘要：

目的:探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区（HAα）和6个串联重复M2蛋白胞外区域（6M2e）的融合蛋白的表达和制备方法，并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法:采用去除高变区的鞭毛蛋白序列，将HAα和6M2e插入到原高变区位点，构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定，并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价，实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果:成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e，蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）37 ℃诱导10 h，通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400，且与对照组相比差异有统计学意义(
t=0.33，
P=0.774；
t=7.60，
P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升高，其中实验组IFN-γ转录水平为38.74±3.65，蛋白水平为（66.03±3.31）pg/mL，高于对照组（
t=21.33，
P=0.003；
t=10.21，
P<0.01）。
结论:成功制备了高纯度的融合蛋白FljBΔD2D3-HAα-6M2e，能有效刺激小鼠产生抗M2e-IgG和抗HAα-IgG，具有良好的免疫效果，为流感疫苗候选物研发奠定了基础。

关键词：正黏病毒科、流感病毒、疫苗、融合蛋白、免疫原性

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资助基金：浙江省自然科学基金LQY19H190001、LQQ20H190001;浙江省医药卫生科技计划2021KY637、2021KY636、2022KY099、2021KY133;浙江省教育厅一般科研项目Y202249202;Natural Science Foundation of Zhejiang ProvinceLQY19H190001, LQQ20H190001;Medical Science and Technology Project of Zhejiang2021KY637, 2021KY636, 2022KY099, 2021KY133;General Scientific Research Project of Zhejiang Education DepartmentY202249202

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：31-38