重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究

摘要：

目的 纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法 提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长cDNA,PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体,利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得重组病毒Re,并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性.结果 构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带.得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定,可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带.构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致.细胞形态学鉴定显示,CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变,CV-A6及Re组则没有明显病变;RT-PCR鉴定也得出相同结果.结论 成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re,重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致,重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性.

关键词：柯萨奇病毒感染、反向遗传技术、重组病毒、感染性

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资助基金：浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室项目2008F3022;浙江省科技计划2017C37120;浙江省重点研发计划2018C03070Project for the Medical Biological Vaccine Key Lab of Zhejiang Province2008F3022;Science and Technology Project of Zhejiang Province2017C37120;Key Research and Development Project of Zhejiang Province2018C03070

在线出版日期：2019-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：93-98