不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较

摘要：

目的 比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果,并比较其优劣.方法 将痰液样本分为二硫苏糖醇(DTT)、氢氧化钠(NaOH)液化痰液组,以生理盐水为对照,分别使用TTIANamp Virus DNA/RNA Kit(方法1)、KBW酶法(方法2)、KBW通用法(方法3)和单一核酸提取试剂盒(方法4)提取核酸,微量核酸分析仪检测核酸纯度,多重定量PCR方法检测核酸的浓度.结果 核酸纯度测定结果:生理盐水组中方法2和方法3,DTT处理组中方法1和方法2,NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1.8;各组中采用方法1所提RNA纯度均明显超过2,方法4及NaOH处理组中方法3所提RNA纯度均低于1.8,其余纯度均在正常范围内.PCR浓度测定结果:腺病毒(DNA)Ct值:生理盐水组＜NaOH处理组(q=35.09,P＜0.05),生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义(q=2.54,P＞0.05);提取方法1＜方法3(q=12.68,P＜0.05),方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=0.84、1.69、2.53,P＞0.05);呼吸道合胞病毒(RNA)Ct值:生理盐水组＜DTT组＜NaOH组(F=152.76,P＜0.01);提取方法1＜方法2＜方法3(q=6.98、3.75,P＜0.05),方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=1.28,P＞0.05).结论 痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取,TIANamp Virus DNMRNA Kit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好.

关键词：痰、痰液液化、核酸共提取、多重定量PCR、腺病毒、呼吸道合胞病毒

所属期刊栏目：43

分类号：X705;TQ430.6;R34

在线出版日期：2016-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：81-85