免疫蛋白质组学技术筛选鉴定日本血吸虫雄虫诊断候选抗原

摘要：

目的 应用经典的免疫蛋白质组技术筛选、鉴定日本血吸虫雄虫抗原蛋白质,以期获得敏感性高、特异性强的诊断抗原.方法 从人工感染日本血吸虫的家兔门静脉中收集血吸虫雄性成虫,提取可溶蛋白；采用双向凝胶电泳与Western印迹相结合(2-D Western印迹)筛选特异性抗原蛋白质点；MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定各抗原蛋白质；将筛选出的体被抗原、ER Calcistorin基因用PCR扩增后插入到pIVEX 1.4WG和pET-28a载体上,分别用麦胚无细胞表达体系和原核表达系统获得重组抗原,Western印迹鉴定其抗原性.结果 用2-D Western印迹共筛选到36个阳性蛋白质点,其中12个点同时也能与健康兔血清反应；24个特异性抗原蛋白质点经MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定,其中19个(79.2％)在NCBI数据库找到匹配蛋白质数据资料.体被抗原均能在麦胚无细胞体系和原核表达体系中表达；免疫印迹显示麦胚无细胞体系表达的重组蛋白有较好抗原性,检测敏感性90％,特异性100％.结论 基于凝胶电泳的免疫蛋白质组学技术用于诊断抗原筛选、鉴定切实可行；与E.coli原核表达体系相比,麦胚无细胞表达体系表达的重组蛋白具有较好的抗原性.

关键词：血吸虫,日本、免疫蛋白质组学、雄虫、抗原

所属期刊栏目：40

资助基金：浙江省科技厅专项公益技术攻关项目2007F10029

在线出版日期：2013-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：239-243,封3