甲型血友病胚胎植入前遗传学诊断成功一例

摘要：

1临床资料
<br>　　育龄夫妇（女方29岁）因甲型血友病（HaemophiliaA）生育风险，于2011年11月1日到南京医科大学第一附属医院生殖医学科门诊咨询。女方弟弟患有甲型血友病，基因检测发现F8 c.3385 C＞T半合子突变，女方及其母亲为F8 c.3385 C＞T杂合突变携带者，家系图及突变位点见图1。F8 c.3385 C＞T突变导致F8蛋白质第1110位氨基酸由谷氨酰胺突变为终止子，导致蛋白截短，功能受损。女方（Ⅱ2）为致病基因携带者，生育男孩50%患病，生育女孩50%携带致病基因，可以通过产前基因诊断（prenatal diagnosis，PND）或胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD）避免患儿的出生，告知生育风险以及2种生育方案的优缺点，与夫妇双方充分沟通、知情同意后，夫妇双方一致要求选择PGD助孕。夫妇双方常规术前准备完善后，采用短效促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）黄体中期降调节联合促性腺激素长方案促排卵。在促排卵刺激周期中，前3天每日予以1000μg曲普瑞林（Triptorelin）肌内注射，而后减少为每日500μg肌内注射直至人绒毛膜促性腺激素（hCG）注射日。病历资料录入本中心的数据库（CCRM）系统。确定降调节后，使用果纳芬（Gonal-F）每日187.3 IU，当超声监测成熟卵泡（≥18 mm）数达到3枚时肌内注射hCG 250 mg，36 h后在经阴道超声引导下穿刺取卵，共获卵17枚。卵子置于通用体外受精（IVF）培养液中3 h，后选择MⅡ期卵子16枚，通过胞浆内单精子注射（ICSI）法受精，受精后卵子置于Quinn′s卵裂期培养液中，在湿化37℃三气培养箱（5%CO2，5%O2和90%N2）中孵育至第3天。选择第3天胚胎具有≥6个细胞，碎片数≤50%的胚胎进行活检。利用激光破膜仪在胚胎透明带上打孔直径约30μm，用直径约35μm活检针抽吸卵裂球。共活检胚胎11枚。活检后胚胎利用玻璃化冷冻技术进行胚胎冷冻保存，待3个月后择期解冻移植。活检单卵裂球通过单细胞全基因组扩增，利用扩增后产物进行短串联重复序列（short tandem repeats，STRs，选择DXS8087和DXS1073）连锁分析，结合微测序突变位点直接分析，以及性别鉴定（Amelogenin）综合判断胚胎是否致病。具体实验方法和技术流程同本课题组的前期文献报道[1]。在活检的11枚胚胎中，10枚获得明确诊断。胚胎E1、E9、E16为正常女性，E3、E4、E8为正常男性，E11、E12、E14为男性患者， E10为女性携带者，检测结果见表1。取卵后3个月行冻胚复苏移植周期治疗，移植E1号胚胎后获得临床持续妊娠，妊娠18周时抽羊水行PND提示胎儿为正常女性，与PGD结果一致，妊娠39周足月顺产一健康女婴。

关键词：血友病A、植入前诊断、受精、体外、胚胎移植、产前诊断、遗传咨询

分类号：R44;R71

资助基金：江苏省科技厅项目BL2012009；江苏省卫生厅资助项目FXK201221

在线出版日期：2014-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：213-214