β-catenin蛋白H36P突变对肝癌细胞的增殖的影响

摘要：

目的 探究β-catenin蛋白H36P突变对肝癌细胞的增殖的影响.方法 通过PCR扩增法扩增CTNNB1 基因,包括WT-CTNNB1、G34R-CTNNB1 和H36P-CTNNB1.通过双酶切法克隆至p-CMV5 质粒载体,将相对应的质粒瞬转至Huh7、HepG2 细胞中,并检测其蛋白表达情况.其次,使用CHX按时间梯度处理表达目的基因的细胞,比较H36P-β-catenin与WT-β-catenin、G34R-β-catenin的泛素化降解情况并分析蛋白稳定性.随后通过质核分离检测H36P-β-catenin核转位能力.最后,通过CCK-8 计数法检查H36P-β-catenin对肝癌细胞增殖能力的影响.结果 突变体G34R、H36P的蛋白质表达水平,与野生型β-catenin无明显差异.在HepG2 细胞株中,CHX作用 8h时WT-β-catenin几乎完全降解,而G34R和H36P只降解了75%和60%.Huh7 细胞株中的情况类似,6 hrs时WT-β-catenin几乎完全降解,而G34R和H36P只降解了约40%.以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05).相较于WT-β-catenin,G34R和H36P促使HepG2细胞增殖量提升.在表达β-catenin突变体的肝癌细胞泛素化降解受抑制的情况下,与WT-β-catenin、突变体G34R相比,表达突变体H36P的肝癌细胞核转位明显增加.结论 β-catenin蛋白H36P突变蛋白表达稳定、核转位情况增多,泛素化降解过程受阻,并能促进HepG2 和Huh7 肝癌细胞的增殖.

关键词：β-catenin蛋白、突变、肝癌、增殖

所属期刊栏目：20

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2023-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：450-454