miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

摘要：

目的 探究miR-300介导LEF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制.方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SKOV3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组.空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞.使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋白质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋白质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 卵巢癌SKOV3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋白相对表达(T=15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=0.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、Bax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、 细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高.结论 miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关.

关键词：卵巢癌、miR-300、LEF-1、细胞增殖、细胞凋亡

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资助基金：北京市卫生和计划生育委员会科研课题 No. 2018040289

在线出版日期：2021-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：14-19