树鼩（Tupaia belangeri）ISG15分子全长克隆及分子生物学功能分析

摘要：

目的：对丙型病毒性肝炎（ hepatitis C virus ， HCV ）小动物模型树鼩的干扰素刺激基因15（ in-terferon stimulated gene 15， ISG15）分子的全长cDNA序列进行克隆及分子生物学功能分析，为树鼩模型在HCV感染天然免疫中的研究提供分子生物学基础。方法根据Genbank中灵长类及其他哺乳类动物ISG15分子序列保守区设计引物，使用Smarter Race方法扩增树鼩ISG15全长序列。在序列两端设计特异性引物，引入酶切位点，进行全长片段扩增。全长 PCR 产物纯化回收后连接至 pMD18-T 载体，构建重组质粒pMD18-T-tbISG15。对重组质粒进行酶切鉴定、测序。对序列进行同源性及种系进化，同时使用 SWISS MODEL同源建模方法进行蛋白二级、三级结构预测及功能分析。结果获得树鼩ISG15全长序列共687 bp，编码157个氨基酸。树鼩ISG15与其他哺乳动物ISG15高度同源，与人的核苷酸及氨基酸序列同源性分别高达72．99％及71．34％，核苷酸及氨基酸序列进化树分析均显示树鼩种系最为接近灵长类动物。结构域分析提示：树鼩ISG15主要由两个类泛素样结构域构成。软件预测所得树鼩ISG15三维结构与人ISG15三维结构高度相似，且具有类泛素样三维结构，动力学检测提示本试验预测的树鼩ISG15三维结构稳定，可信度高。结论对树鼩ISG15的克隆进一步完善了对树鼩模型的认识。为进一步在体内研究HCV感染的天然免疫机制奠定了分子生物学基础。

关键词：树鼩、丙型病毒性肝炎、动物模型、干扰素刺激基因15、天然免疫

分类号：Q7;Q93;Q95

资助基金：国家传染病科技重大专项课题2008 ZX10002011，2012 ZX10004503;科技部国际合作与交流专项2011 DFA31030;华中科技大学研究生创新创业基金No．HF-11-30-2013This work was supported by grants from the National Major Science and Technology Special Project for Infectious Diseases of China2008 ZX10002011，2012 ZX10004503;the International Science & Technology Cooperation Program of China No．2011

在线出版日期：2014-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：132-138