T4噬菌体32蛋白的表达、纯化及鉴定

摘要：

目的 构建T4噬菌体32蛋白的原核表达质粒T4-32-pET28b,并表达、纯化和鉴定重组目的 蛋白.方法以T4噬菌体DNA 基因组为模板,PCR扩增得到32蛋白基因片段,定向克隆到原核表达载体pET28b中,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达目的 蛋白,然后进行镍柱纯化和G-25脱盐,获得纯化目的 蛋白,并进行核酸酶和细菌基因组污染检测及结合DNA单链能力检测.结果 构建的T4-32-pET28b质粒经酶切及测序鉴定正确,在BL21(DE3)成功表达了T4-32蛋白,经镍柱和脱盐纯化获得了高纯度的目的 蛋白.结论 成功构建了T4噬菌体32蛋白的原核表达载体T4- 32-pET28b,并实现高表达和纯化了目的 表达产物.

关键词：T4噬菌体、32蛋白、纯化、表达、pET28b、BL21(DE3)

所属期刊栏目：9

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：广东省自然科学基金S2012040006975;南方医科大学南方医院院长基金2009C020

在线出版日期：2013-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：272-276