丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK/ERK信号通路促进肝癌细胞增殖

摘要：

目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码蛋白E1的生物学功能.方法 分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的腺病毒载体Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT-PCR方法在转录水平鉴定HCV E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的表达,用Western 印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达.腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白.将筛选到的Ad-E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT-PCR检测c-Myc、cyclinD1、c-Jun、c-Fos基因的表达.结果 成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的高滴度腺病毒Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b,并且通过RT-PCR方法在转录水平鉴定了目的 基因的表达,Western 印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蛋白的表达.通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad-E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞 34.38 %处于S期,明显高于Ad-GFP(27.32 %)(P＜0.05)对照组;Ad-E1感染组p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK/ERK下游基因转录水平上调.结论 体外过表达HCV E1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK/ERK信号通路的活化相关.

关键词：丙型肝炎病毒、E1蛋白、丝裂原活化蛋白激酶、细胞增殖

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分类号：R512.6+3(传染病)

资助基金：国家自然科学基金30972586,31171307;重庆市自然科学基金重点项目CSTC 2009BA5036

在线出版日期：2012-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：42-48