PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证

摘要：

目的 验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域(PML-C)和RAN结合蛋白9(RANBP9)之间的相互作用.方法 构建分别表达诱饵蛋白PML-C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9,然后转入酵母AH109,培养3～5 d后对其是否有胞内相互作用进行检测.将目的 片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV-HA和pCMV-myc里,然后共转染人胚肾293细胞里(HEK293),最后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析.结果 在共转化了质粒pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长.用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀,再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,最终检测出融合蛋白myc-RANBP9条带.结论 酵母双杂交实验验证了PML-C和RANBP9之间存在胞内相互作用,同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用.

关键词：白血病、蛋白质相互作用、酵母双杂交系统、免疫共沉淀

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分类号：R733.71(肿瘤学)

资助基金：grants from the General Program of National Natural Science Foundation of ChinaNSFC,81171658;the Major Program of Natural Science Foundation of ChongqingCSTC,2011BA5037

在线出版日期：2012-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5