小鼠Kupffer细胞分离及细胞培养

摘要：

目的 采用在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs),探讨其在分离小鼠KCs的应用及其对KCs生物活性的影响.方法 根据原位灌注和梯度离心方法不同随机分为4组:无胶原酶原位灌注+3层梯度离心组(A)、无胶原酶原位灌注+双层梯度离心组(B)、胶原酶原位灌注+3层梯度离心组(C)和胶原酶原位灌注+双层梯度离心组(D).采用F4/80(BM8)免疫染色及吞墨实验判断细胞纯度和功能、台盼蓝拒染实验判断细胞的活力,探讨不同方法KCs分离的效果及细胞活性.结果 刚分离的KCs细胞近似圆形,接种l h后收获细胞纯度较高,但细胞得率相对较低.培养4 h后KCs得率相对较高,培养28 d仍能存活.免疫荧光可显示分离的为KCs,台盼蓝染色显示各组细胞的活力均在90 %左右,在体胶原酶灌注和双层梯度离心可以增加KCs的得率,双层梯度离心法可以增加分离KCs的纯度.结论 在体胶原酶灌注对提高KCs得率较为重要,在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离小鼠KCs的的方法简便、高效、稳定,培养的KCs具有良好的细胞生物学性状.

关键词：Kupffer细胞、细胞分离、梯度离心法、细胞原代培养

所属期刊栏目：8

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金81070374

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：484-488