肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a(+)内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果 从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1:2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论 成功构建了pET-28a(+)-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的 蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.

关键词：肺炎链球菌、SpxA表达纯化、多克隆抗体

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分类号：R378.14(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30800016;重庆市卫生局科技研究项目2010-2-218

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：475-478