通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用

摘要：

目的 鉴定基因spd-ABC、spd-1672、spd-1673和长间隔序列spd-J在肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)毒力中的作用.方法 采用长臂同源聚合酶链反应(LFH-PCR)的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因(erm)替代缺失突变体,通过PCR和测序鉴定是否构建成功;通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响,通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响.结果 所构建缺陷菌目的 基因由erm基因完全替代;spd-ABC、spd-1673和长间隔序列spd-J 3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异,生长大约5 h A值均可达到峰值,而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象,生长8 h后其A值才达到最高值;野生菌与缺失spd-ABC、spd-1673和长间隔序列spd-J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24 h,差异无统计学意义,而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75 h左右,显著长于野生菌感染小鼠组(P＜0.05).结论 在构建的4个单个基因缺失突变体中,spd-1672缺陷后S.pn生长明显延迟,毒力显著下降,提示spd-1672是S.pn的一个新的毒力因子.

关键词：肺炎链球菌、单一突变、生长、毒力

所属期刊栏目：8

分类号：R349.6(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30970110;重庆市卫生局科技研究项目2010-2-218

在线出版日期：2011-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：327-333