构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株

摘要：

目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES-Puromycin 载体中获得pGC-PM-RFP重组质粒,经脂质体转染到293T 细胞中获得慢病毒LV-PM-RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM-RFP细胞株.结果 PCR及测序结果证实目的 基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV-PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP.结论 成功构建了慢病毒重组质粒pGC-PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM-RFP细胞株.

关键词：红色荧光蛋白、慢病毒重组质粒、嘌呤霉素、人白血病K562细胞

所属期刊栏目：8

分类号：R349.5(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：重庆市科技攻关计划项目CSTC,2009AB5081

在线出版日期：2011-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：304-308