Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建

摘要：

目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.

关键词：人类Tudor-SN蛋白、SN5、pEGFP-C2、结构预测、拼接、重组质粒、融合蛋白

所属期刊栏目：8

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划资助项目863计划2007AA02Zll5;国家自然科学基金No.30670441,30970562,30670802,30811130394,30911130165,30970582;天津市科委国际合作项目07JCZDJC07300;国家自然科学重大研究计划培育项目90919032;国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金20091202110001;天津市教委重点项目2008ZD01

在线出版日期：2011-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：204-209