白细胞介素6重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达.方法 以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板,经PCR获得目的基因IL-6,将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中,构建重组逆转录病毒质粒pSEB-IL-6,经脂质体分别转染到PC12细胞和HEK293细胞中,应用Real-time PCR和ELISA的方法 在mRNA和蛋白质水平检测IL-6的表达变化.继而用HEK293细胞中包装获得的含有pSEB-IL-6的病毒颗粒进一步感染PC12细胞,Real-time PCR检测IL-6 mRNA的表达水平变化.结果 PCR电泳及酶切鉴定证实目的基因正确克隆至逆转录病毒载体中,其基因序列与Genbank报道一致;Real-time PCR和ELISA结果 均显示,逆转录病毒质粒pSEB-IL-6转染PC12细胞和HEK293细胞后,IL-6的表达水平较对照组显著上调;经pSEB-IL-6逆转录病毒颗粒感染的PC12细胞中,IL-6 mRNA表达水平较对照组提高4倍.结论 成功构建了特异性表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体pSEB-IL-6,并获得了具有感染能力的逆转录病毒颗粒,感染真核细胞后可高表达IL-6,为进一步研究IL-6的功能及其在多种疾病中的免疫调节机制提供重要的分子手段.

关键词：白细胞介素6、逆转录病毒载体pSEB-3H、PC12细胞、HEK293细胞

所属期刊栏目：8

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30872670;重庆市卫生局重点项目渝卫2009-1-41

在线出版日期：2011-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：21-25