PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布

摘要：

目的 将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP-C2质粒,使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,观察其在HeLa细胞中的表达及定位. 方法 以重组质粒pEGFP-C2-PSF为模板,PCR法扩增出目的基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP-C2上,构建重组质粒pEGFP-C2- PSF(Ⅰ～Ⅴ).将构建成功的pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)质粒脂质体法转染HeLa细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布. 结果 成功构建质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ),并在HeLa细胞中实现表达;Western印迹检测到融合蛋白GFP-PSF(Ⅰ～Ⅴ);在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位. 结论 人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)构建成功,可用于标记PSF蛋白的不同功能片段,为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础.

关键词：人类PSF蛋白、pEGFP-C2、重组质粒、融合蛋白

所属期刊栏目：7

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2007AA02Zll5;国家自然科学基金30670441,30970562,30670802,30811130394,30911130165,30970582;国家重点基础研究发展规划973计划2009CB918903;天津市科委国际合作项目07JCZDJC07300;国家自然科学重大研究计划培育项目90919032;国家教育疗高等学校博士学科点专项科研基金20091202110001;天津市教委重点项目2008ZD01

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：115-120