人Hes1-shRNA,Hes5-shRNA慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

摘要：

目的 构建人Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,为Notch-Hes信号通路的相关研究奠定基础.方法 根据人Hes1,Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸,退火后克隆至pENTR /U6入门载体.通过入门载体瞬时转染神经胶质瘤U251细胞筛选有效干扰序列.将含有效干扰序列的入门载体与pLenti6/BLOCK-iT-DEST载体进行LR重组构建Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导入293FT细胞,包装成慢病毒.用该慢病毒感染U251细胞,Western印迹法分别检测Hes1,Hes5蛋白的表达.结果 分别构建了针对Hes1和Hes5基因的特异性shRNA慢病毒表达载体,其包装获得慢病毒可有效感染U251细胞并分别对Hes1,Hes5蛋白的表达有显著抑制作用.结论 成功构建了Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体.

关键词：Notch信号通路、Hes1基因、Hes5基因、慢病毒

所属期刊栏目：7

分类号：R341(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：福建省自然科学基金C0810017;福建医科大学研究基金JS06008

在线出版日期：2010-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：54-58