不同启动子指导的HSV1-sr39TK/GCV系统对小鼠淋巴细胞的敏感性研究

摘要：

目的 观察慢病毒载体中不同启动子指导的突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSVl-sr39TK)基因在小鼠T淋巴细胞内的表达差异,并进一步比较对丙氧鸟苷(ganciclovir, GCV)的敏感性.方法 用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-sr39TK基因分别连接至慢病毒载体不同启动子后,然后在HSV1-sr39TK基因后以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)连接绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)报告基因;采用三质粒包装系统包装病毒,将病毒感染刀豆蛋白A(concanavalin, ConA)激活的小鼠淋巴细胞,分别用流式细胞术、RT-PCR法鉴定HSV1-sr39TK和GFP基因在小鼠淋巴细胞的表达,用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法观察感染不同病毒的淋巴细胞对前体药物GCV的敏感性.结果 不同启动子指导的HSV1-sr39TK及GFP基因均可在小鼠淋巴细胞表达,巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)启动子驱动表达能力最强,磷酸甘油激酶(phosphoglycerokinase, PGK)启动子最弱.感染含CMV启动子病毒的淋巴细胞对GCV的IC50值最小.结论 在小鼠淋巴细胞内CMV启动子驱动的慢病毒载体HSV1-sr39TK基因表达最强,对前体药物GCV敏感性最高.

关键词：慢病毒载体、丙氧鸟苷、单纯疱疹病毒I型胸苷激酶、淋巴细胞

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分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30170389;江苏省高校自然科学基金02KJB320013

在线出版日期：2008-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：124-128