Nono蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

摘要：

目的 表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的Nono(non-POU-domain-containing,octamer-binding protein)融合蛋白并制备抗Nono多克隆抗体.方法 构建pET-28a(+)-Nono重组表达质粒,转入Rosetta(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导6×His-Nono融合蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化出的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western印迹检测多克隆抗体的特异性.结果 在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的His-Nono融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫小鼠,获得了高特异性的抗Nono抗血清.结论 成功构建pET-28a(+)-Nono原核表达质粒,表达并纯化出高纯度的目标蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.

关键词：COX-2基因、基因重组、融合蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：4

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金30370676

在线出版日期：2007-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：375-379