10.3870/j.issn.1672-8009.2007.01.004
宫颈癌相关BLCAP基因的原核表达及条件优化
目的 利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件.方法 利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定.结果 构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28 ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件.结论 成功构建了pET-32(a)-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础.
宫颈癌、BLCAP基因、原核表达、条件优化
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R73(肿瘤学)
国家自然科学基金30250008;湖北省自然科学基金301130735
2007-03-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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