酵母双杂交文库筛选及N型钙离子通道与BART相互作用的初步分析

摘要：

目的应用酵母双杂交技术筛选N型钙离子通道相关蛋白,并对候选蛋白BART(binder of arl two)进行初步分析.方法用N型钙离子通道α1亚基C端630个氨基酸残基肽段(Calcium channel 630 amino acids,CaCh630)作为探针,运用酵母双杂交技术筛选出与之相互作用的基因.通过PCR扩增并克隆候选基因BART,然后分别构建带有红色荧光蛋白标签的表达载体pDsRed-BART和带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-CaCh630,共转染海马神经元后,用激光共聚焦扫描显微镜观察这两个外源蛋白在细胞中的定位情况.结果应用酵母双杂交技术筛选出6个相关基因,体外共转染试验发现BART和CaCh630分子在海马神经元内有共定位现象,进一步证明其可能存在相互作用.结论BART可能在维持钙离子通道细胞骨架中定位起重要作用.

关键词：酵母双杂交技术、钙离子通道、共定位

所属期刊栏目：3

分类号：Q189(寄生生物学)

资助基金：中国科学院资助项目30370492

在线出版日期：2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-25