CD8+CIK细胞表面NKG2D及TCR抗原识别受体的功能分析

摘要：

目的 探讨CD8+细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)亚群表面T细胞受体(TCR)和NKG2D(即CD314)抗原识别受体在发挥抗肿瘤特别是卵巢癌免疫效应中的功能.方法 CIK细胞由卵巢癌志愿者外周血单个核细胞(PBMCs)制备而成,采用磁性细胞分选(MACS)技术从培养1周的CIK细胞中富集CD8+亚群并继续培养扩增,获得高度均质性的CD8+CIK细胞后进行表型检测.将CD8+CIK细胞分别在CD3抗体和NKG2D抗体包被的培养板中进行培养,以CD137为CD8+CIK细胞激活标志物,应用流式细胞术(FCM)检测CD137表达,评估CD8+CIK细胞的激活状况.并检测经CD3抗体、NKG2D抗体刺激或与红白血病细胞株人类白细胞抗原(HLA)-主要组织相容性复合体-Ⅰ类相关分子(MIC)A/B+K562细胞共培养对CD8+CIK细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的影响.选用 K562细胞作为 CD8+CIK 细胞作用的靶细胞,应用 NKG2D 抗体阻断 NKG2D与MICA/B相互作用,测试激活的CD8+CIK细胞在NKG2D阻断状态下对靶细胞K562的杀伤能力.结果 TCR能够提供CD8+CIK细胞的激活信号,而NKG2D不具备该功能.外周血单个核细胞(PBMC)中CD8+细胞占24.2%,该细胞群中 NKG2D阳性率为16.3%.CIK培养后CD8+细胞比例增至88.1%,这些CD8+CIK细胞均表达NKG2D,但其中仍含10% 左右的CD8-细胞;CD3抗体组中CD137阳性率为88.8%;CD3抗体刺激后24h,约50% 的CD8+CIK细胞呈IFN-γ染色阳性,而NKG2D抗体刺激后,IFN-γ阳性率(4.8% 和5.6%)高于对照组(2.9%),但明显低于CD3抗体;CD8+CIK细胞经CD3抗体刺激24h后IFN-γ检测阳性率为41.9%,但与K562细胞按1:1比例共培养后阳性率仅为0.5%.CD8+CIK细胞对K562细胞具有杀伤功能,即能够以HLA非限制的方式杀伤靶细胞.而在CD3-TCR复合物激活的CD8+CIK细胞上阻断NKG2D与 MICA/B相互作用后,CD8+CIK细胞杀伤活性受到抑制.结论 CD8+CIK细胞的激活主要通过CD3-TCR受体复合物,而非通过NKG2D受体.CD8+CIK细胞的NKG2D受体与靶细胞表面相应配体结合后可以介导 HLA非限制的抗癌功能,但NKG2D受体的此种作用比较有限.

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞、CD8+CIK、T细胞受体、NKG2D

所属期刊栏目：29

分类号：R173(妇幼卫生)

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：428-435