FSHβ锚定的外泌体制备及其对卵巢癌细胞诱导杀伤作用

摘要：

目的 探讨分析卵泡刺激素受体-β(FSHβ)锚定的外泌体(exosomes,Ex)制备及其对卵巢癌细胞诱导杀伤作用.方法 构建pDisplay-FSH重组质粒并制备exosomes,检测exosomes的形态及相关蛋白分子表达情况.通过混合淋巴细胞实验和肿瘤细胞毒性实验,观察Ex/FSHβ 对T细胞的诱导增殖及对卵巢癌细胞的杀伤作用.结果 成功构建重组质粒pDisplay-FSHβ 并稳定转染至HEK293细胞.经磷酸腺肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)洗脱后,HEK293-FSHβ 组洗脱液中FSHβ 水平显著高于HEK293组 、HEK293-N1组(t值分别为17.221、19.583,均P<0.05).蛋白免疫印迹法检测显示,Ex/FSHβ 组黏附分子1(ICAM-1)、CD86及人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)相对表达量与Ex/N1组 、Ex组比较,差异有统计学意义(t=5.147～7.886,均P<0.05).树突状细胞(DC)-Ex/FSHβ 组T细胞增殖指数与DC-Ex/N1组 、DC-Ex组及DC组比较,差异有统计学意义(t值分别为8.634、9.773、11.264,均P<0.05).效靶比在60:1时,DC-Ex/FSHβ 组杀伤率最高.效靶比在60:1时,DC-Ex/FSHβ 组干扰素-γ(INF-γ)水平 、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量与DC-Ex/N1组 、DC-Ex组及DC组比较,差异均有统计学意义(t=17.627～39.854,均P<0.05).迁移实验显示,DC-Ex/FSHβ 组细胞穿过聚碳质膜微孔的细胞数显著低于DC-Ex/N1组 、DC-Ex组及DC组(t值分别为17.396、16.517、34.892,均P<0.05).结论 基因重组技术可将FSHβ 锚定到HEK293细胞来源的exosomes上,DC-Ex/FSHβ 能够诱导细胞毒性T细胞对卵巢癌细胞产生较强的诱导杀伤作用,这一作用为临床以exosomes为基础的肿瘤免疫治疗提供了一定的理论依据.

关键词：卵巢癌、外泌体、卵泡刺激素受体β、抗肿瘤

所属期刊栏目：28

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：2015年湖北省十堰市科学技术研究与开发资助项目15k69

在线出版日期：2018-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1601-1605