99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

摘要：

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针
99Tc
m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺），探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。
方法:设计并通过化学修饰合成HOTAIR的ASON，使用双功能螯合剂HYNIC偶联
99Tc
m并进行纯化。采用快速薄层层析(ITLC）法和琼脂糖凝胶电泳分别检测探针的标记率、放射化学纯度、体外稳定性及完整性。细胞摄取实验分为2组：Lipo-
99Tc
m-HYNIC-ASON组（转染组）和
99Tc
m-HYNIC-ASON组（未转染组），通过脂质体转染探针，测定人脑胶质瘤U87细胞对探针的摄取率；细胞计数试剂盒8(CCK-8）实验和细胞划痕实验分为3组：Lipo-
99Tc
m-HYNIC-ASON组（转染组）、
99Tc
m-HYNIC-ASON组（未转染组）、
99Tc
m-Control组（对照组），分别检测转染探针后细胞增殖和迁移能力的变化。2组间比较采用Student
t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
结果:99Tc
m-HYNIC-ASON的标记率为（90.0±5.6）%。琼脂糖凝胶电泳结果显示，
99Tc
m与探针成功标记并且没有明显的降解，探针孵育12 h的放射化学纯度>80%。细胞摄取实验结果显示，转染后5 h，探针Lipo-
99Tc
m-HYNIC-ASON在人脑胶质瘤U87细胞中的摄取率最大（0.70%），与未转染组（0.16%）相比，差异有统计学意义（
t=17.81，
P<0.01）。CCK-8实验结果显示，转染探针Lipo-
99Tc
m-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖能力，与未转染组相比，在各个时间点（1、2、3、4、5 d）的差异均有统计学意义（
t=2.336~30.230,均
P<0.05）。细胞划痕实验结果显示，转染探针Lipo-
99Tc
m-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的迁移，3组细胞间隙融合率的差异有统计学意义(
F=331.8，
P<0.01)，与未转染组相比，转染组细胞间隙融合率明显降低，且差异有统计学意义（60.0％对23.6%，
t=51.54，
P<0.01）。
结论:成功合成了靶向人脑胶质瘤lncRNA HOTAIR的探针
99Tc
m-HYNIC-ASON，该探针具有良好的体外稳定性和靶向结合能力，能够抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖和迁移。

关键词：RNA，长链非编码、寡核苷酸类，反义、神经胶质瘤、99m锝高锝酸钠、分子探针、同源异型盒基因转录的反义基因间RNA

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资助基金：国家自然科学基金81560292;National Natural Science Foundation of China81560292

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：162-169