Treg分化对放射性肺损伤的影响

摘要：

目的:探讨调节性T细胞（Treg）的分化对放射性肺损伤的影响及其作用机制。方法:建立Treg抑制小鼠模型，按随机数字表法将C57BL/6小鼠分成4组：空白对照组、单纯照射组、照射+免疫球蛋白G（IgG）组和照射+CD25组，每组12只，除空白对照组外其余3组小鼠给予单次20 Gy X射线全胸照射，照射+IgG组和照射+CD25组小鼠每周腹腔注射IgG抗体和CD25抗体。分别于照射后第4周和第8周各处死小鼠6只，采用流式细胞术检测小鼠肺组织内CD25
+Foxp3
+Treg（Foxp3：叉头样转录因子3）的百分比以鉴定模型是否建立成功；采用Western blot法检测单纯照射组小鼠肺组织内神经纤毛蛋白1（NRP1）的表达；采用免疫荧光法检测每组小鼠肺组织内CD25
+NRP1
+Treg的百分比；拍照并观察每组小鼠皮肤的损伤情况，采用苏木精-伊红染色法检测小鼠肺组织的病理学改变；采用酶联免疫吸附测定法检测每组小鼠肺组织内转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素（IL）-17A、干扰素γ（IFN-γ）、IL-2和IL-4的水平变化。两组间比较采用独立样本
t检验。
结果:流式细胞术检测结果显示，照射后第4周和第8周，单纯照射组小鼠肺组织内CD25
+Foxp3
+Treg百分比[（1.73±0.04）%、（2.13±0.15）%]均较空白对照组[（1.14±0.02）%、（1.70±0.06）%]明显升高，差异均有统计学意义（
t=-26.680、-4.545，
P=0.000、0.010），抑制Treg后，第4周和第8周时照射+CD25组小鼠肺组织内CD25
+Foxp3
+Treg百分比[（0.72±0.14）%、（0.27±0.02）%]均较单纯照射组明显降低，差异均有统计学意义（
t=5.296、37.538，均
P=0.000）。Western blot结果显示，照射后第4周和第8周，单纯照射组小鼠肺组织内NRP1蛋白表达水平均较空白对照组升高，差异均有统计学意义（
t=-7.341、-9.127，均
P=0.000）。免疫荧光法检测结果显示，照射后第4周和第8周，单纯照射组小鼠肺组织内CD25
+NRP1
+Treg的百分比均较空白对照组升高，而照射+CD25组CD25
+NRP1
+Treg百分比均较单纯照射组降低，且差异均有统计学意义（
t=8.926、14.457，
P=0.001、0.000）。观察小鼠皮肤损伤程度后发现，照射后第4周和第8周，单纯照射组小鼠皮肤损伤严重，而照射+CD25组小鼠照射后第4周时皮肤基本完好，第8周时出现脱毛脱皮。病理学结果显示，照射后第4周和第8周，与空白对照组相比，单纯照射组小鼠的肺组织结构破坏，肺泡壁增厚，细胞外基质增多，而照射+CD25组小鼠的肺组织结构完整，肺泡壁纤细。酶联免疫吸附测定结果显示，与空白对照组相比，照射后第4周，单纯照射组小鼠肺组织内IL-17A和IL-4的水平均升高，差异均有统计学意义（
t=-8.492、-15.796，
P=0.001、0.000），照射后第8周，TGF-β1和IL-17A水平升高，差异均有统计学意义（
t=-11.072、-7.167，
P=0.000、0.002），IL-2水平在第4周和第8周时均降低，IFN-γ水平在第4周时升高，差异有统计学意义（
t=-27.393，
P=0.000），第8周时下降；与单纯照射组相比，照射+CD25组小鼠TGF-β1和IL-17A水平在第4周和第8周时均降低（
t=6.037、4.524、5.496、4.772，均
P=0.000），IFN-γ水平升高（
t=-7.006、-12.565，
P=0.002、0.000），差异均有统计学意义，而IL-2和IL-4水平在第4周时均降低，第8周时均明显升高，差异均有统计学意义（
t=2.866、-9.090、8.833、-7.191，均
P=0.000）。
结论:放射性肺损伤小鼠的肺组织中出现Treg分化，并增强分泌TGF-β1促炎因子，同时干扰辅助T细胞（Th1、Th2型）细胞因子的平衡来促进放射性肺损伤的发生。

关键词：T淋巴细胞，调节性、T淋巴细胞，辅助诱导、模型，动物、Th细胞平衡、放射性肺损伤

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资助基金：国家自然科学基金81573085、81872550;National Natural Science Foundation of China81573085, 81872550

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：276-285