耐辐射奇球菌pprM基因回补株的构建与鉴定

摘要：

目的 构建耐辐射奇球菌prM基因缺失回补菌株,为进一步研究PprM蛋白的功能奠定实验基础.方法 设计并合成HA-pprM基因(HA为流感病毒血凝素)全长的引物,以无突变的pGEX-6p-1-pprM载体为模板,PCR扩增出携带NdeⅠ酶切位点的HA-pprM基因全长,经NdeⅠ酶切后,与pRADK载体连接并转化大肠杆菌,经培养、提取质粒及纯化后,采用酶切鉴定以及基因测序方法确认插入序列的正确性;采用CaC12法将构建好的重组质粒pRADK-HA-pprM转化到耐辐射奇球菌pprM基因缺失的菌株中,通过Western blot验证HA-PprM融合蛋白的表达.结果 构建的重组质粒pRADK-HA-pprM经NdeⅠ酶切鉴定结果符合目的条带大小(438 bp),测序结果显示插入的寡核苷酸序列及方向与预期的一致,Western blot结果显示HA-PprM融合蛋白的相对分子质量约为13 000.结论 笔者成功构建了重组质粒pRADK-HA-pprM,为进一步研究与PprM蛋白相互作用的靶DNA的筛选奠定了良好的基础.

关键词：奇异珠菌属、pprM基因、回补株构建

所属期刊栏目：40

分类号：R575;Q933;R378

在线出版日期：2016-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：115-119