基于iTRAQ联合2D LC-MS/MS分析PM2.5对人类胎盘滋养细胞的影响

摘要：

目的:利用蛋白组学方法初步筛选PM2.5通过影响人类胎盘滋养细胞造成不良妊娠率增加可能涉及的蛋白分子和生物进程.方法:用0、30、60、120和200 μg/mL的PM2.5分别染毒HTR-8/SVneo细胞24 h与48 h后观察细胞增殖情况,最终确定以120 μg/mL PM2.5染毒细胞24h和48 h进行后续实验.提取胞内蛋白,酶解消化后,同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)标记联合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术分析肽段,鉴定HTR-8/SVneo细胞内的差异表达蛋白,并进行生物信息学分析.结果:120 μg/mLPM2.5染毒24h和48 h后的存活率分别为86.09％和52.36％,与对照组(0μg/mL PM2.5染毒组)相比,细胞存活率显著下降(P＜0.05).120 μg/mL PM2.5 24 h染毒组和48 h染毒组细胞中分别鉴定出182个和486个差异蛋白,涉及细胞生物进程22条和217条.结论:PM2.5对HTR-8/SVneo细胞的影响涉及大量细胞生物进程的改变;iTRAQ联合2DLC-MS/MS技术是一种对染毒后细胞内差异表达蛋白高敏感度、高通量筛选的有效途径,为今后对PM2.5增加不良妊娠结局风险的深入机制研究奠定基础.

关键词：蛋白质组、空气污染物、串联质谱法、人绒毛膜外滋养层细胞、同位素标记相对和绝对定量技术

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分类号：R32;R39

资助基金：国家自然科学基金81402691;天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目15JCZDJC36000

在线出版日期：2017-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：202-207,封3