稳定沉默STAT3的HPV16阳性宫颈癌细胞株的建立

摘要：

目的：建立针对人信号传导与转录激活因子3（STAT3）的小发夹RNA（shRNA）逆转录病毒表达载体，建立稳定感染的人乳头瘤病毒16（HPV16）阳性宫颈癌细胞系，以进一步探讨STAT3在HPV16阳性宫颈癌发生和发展中的作用。方法：设计合成3条靶向STAT3基因的小干扰RNA（siRNA），从中选择1条具有最佳干扰效果的siRNA，构建STAT3-shRNA载体pSUPERretro-puro-STAT3，用293FT细胞包装质粒产生STAT3 shRNA逆转录病毒，感染HPV16阳性的宫颈癌细胞株SiHa和CaSki细胞后，通过嘌呤霉素筛选2周，约3 d传代1次，建立稳定细胞株，稳定沉默STAT3的细胞株命名为SiHa/STAT3-sh和CaSki/STAT3-sh。通过实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹（Western blotting）分别从mRNA和蛋白水平检测STAT3的表达量。结果：经RT-PCR和Western blotting实验证实，在SiHa/STAT3-sh和CaSki/STAT3-sh细胞中，STAT3 mRNA的抑制率达99%以上（P＜0.01），STAT3总蛋白抑制率达70%以上（P＜0.01），磷酸化STAT3蛋白的抑制率达78%以上（P＜0.01）。结论：稳定沉默STAT3的HPV16阳性宫颈癌细胞株建立成功。

关键词：宫颈肿瘤、癌、DNA结合蛋白质类、人乳头瘤病毒16、RNA干扰、逆转录病毒科

分类号：R73;R97

在线出版日期：2014-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：366-369