干扰ALDH1A1表达的shRNA载体成功转染宫颈癌HeLa细胞及意义
目的:采用shRNA转染构建干扰乙醛脱氢酶-1(ALDH1A1)表达的宫颈癌HeLa细胞,以进一步探讨ALDH1A1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系.方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,加入梯度浓度G418溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度；取对数生长期细胞,采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒(ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照质粒(shNC)转染宫颈癌HeLa细胞.5种重组质粒与Lipofectamine 2000脂质体的比例均为0.2 μg:1 μL,空白对照组中仅加入Lipofectamine 2000脂质体.6h后换液,24h后荧光显微镜下观察荧光表达情况.结果:确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L；5种重组质粒均成功转染人HeLa细胞中.其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67％;ALDH1A1-574的转染效率为1.16％；ALDH1A1-740的转染效率为12.45％；ALDH1A1-921的转染效率为3.42％；shNC组的转染效率为1.02％.结论:干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好.
ALDH1A1、RNA、小分子干扰、转染、HeLa细胞
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R73;U45
国家自然科学基金青年基金81101979;广东省医学科研基金B2011088;广东省自然博士启动S2011040004639
2013-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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