双启动子共表达杆状病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的 探讨双启动子共表达杆状病毒载体作为双基因传递载体的可行性.方法 利用分子克隆技术将分别由巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子介导下的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和胶质细胞源形神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)克隆到pFastBac Dual载体中,得到重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF,并利用Lipofectamine 2000将其转染到HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法检测EGFP和GDNF的表达情况.按照Bac-to-Bac杆状病毒表达系统手册进行杆状病毒的包装,将获得的重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF转导Hela细胞,通过间接免疫荧光法和Western blot检测EGFP和GDNF的表达情况.结果 重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功构建；重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功包装；EGFP和GDNF实现了在293T细胞中和Hela细胞中的共表达.结论 pFastBac Dual载体为一个有效的双基因传递载体,为多基因联合治疗提供了一个强有力的病毒载体.

关键词：杆状病毒、双启动子、共表达、双基因传递载体、多基因联合治疗

所属期刊栏目：20

分类号：Q31;Q78;S828.2

资助基金：上海市科委项目114119a6400

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：207-211