不明原因肺炎监测中SARS-CoV实时荧光RT-PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立SARS-CoV的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法并进行评估,为不明原因肺炎监测中SARS-CoV感染的排查提供实验室检测依据.方法利用SARS-CoV的1b基因和NP基因的特异性序列设计引物和探针,两条探针5'端标记FAM,3'端标记TAMRA.与国家流感中心发布的高致病性人禽流感H5N1的实时荧光RT-PCR检测方法进行整合,优化了反应体系及反应条件,并对不同浓度的含有目的基因的质粒以及12种其他呼吸道病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌核酸进行检测,验证该方法的特异性、敏感性和重复性.结果该方法所检测的12种呼吸道病毒及肺炎支原体和嗜肺军团杆菌均为阴性;对目的基因的检测灵敏度1b基因达10-9μg/ml DNA/反应,NP基因达10-7μg/ml DNA/反应;重复性实验中,变异系数为0.2%-0.9%;从样本的核酸提取至检测完成仅需2.5h左右,并可与高致病性人禽流感H5N1的检测同台仪器同条件下完成.结论本文建立的TaqMan探针实时荧光RT-PCR是一种检测SARS-CoV的特异、快速、敏感的方法.该方法的建立将有益于今后开展不明原因肺炎监测以及应急临床标本中SARS-CoV感染的排查和快速检测.

关键词：SARS-CoV、不明原因肺炎、实时荧光RT-PCR

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分类号：R5(内科学)

在线出版日期：2011-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：15-22