酿酒葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立
[目的]建立快速、灵敏的葡萄病毒多重RT-PCR检测体系.[方法]通过设计6对不同引物,在退火温度分别为48.0、49.0、50.0、51.0、52.0、53.0、54.0、55.0、56.0、57,0、58.0、59.0和60.0℃,采用单一RT-PCR技术检测酿酒葡萄6种常见的葡萄病毒,即葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFKV)、葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)、葡萄卷叶病毒1(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRaV-1)、葡萄卷叶病毒2(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRaV-2)和葡萄卷叶病毒4(Grapevine leafroll associated virus-4,GLRaV-4).在此基础上,对退火温度相似、扩增片段长度不同的引物进行组合,建立能同时检测2种或2种以上病毒的多重RT-PCR检测体系.[结果]单一RT-PCR结果显示,退火温度为49℃、55℃和60℃时,可分别检测GVA和GLRaV、GLRaV和GFKV以及GFLV和GLRaV.多重RT-PCR结果显示,退火温度分别为49℃和55℃时,引物GVA和GLRaV-2以及引物GLRaV-1和GFKV组合所建立的2个多重RT-PCR检测体系可同时检测葡萄叶片中GVA和GLRaV以及GLRaV和GFKV.所检测的河西地区16份样品普遍携带葡萄病毒,部分葡萄样品同时携带两种病毒.其中,5份样品为GVA阳性,8份为GLRaV-1阳性,3份为GLRaV-2阳性,5份为GFKV阳性,所有样品均未检测到GFLV和GLRaV-4.退火温度分别为49℃和55℃时所建立的GVA和GLRaV以及GLRaV和GFKV两个多重PCR扩增体系检测结果与各样品单一PCR检测结果均一致.[结论]建立2套多重PCR检测体系,可同时有效地检测GVA和GLRaV-2或GLRaV-1和GFKV,可用于田间葡萄样品的快速检测.
酿酒葡萄、病毒、检测、多重RT-PCR
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S663.1(果树园艺)
甘肃省农牧厅农业科技创新项目GNCX-2013-38
2017-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
632-638
