甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建

摘要：

蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质.从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合.重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5'(2 859 bp)和3'(852 bp).应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3 692 bp.该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97％～99％的同源性,登录号DQ364058.应用BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SIS.该载体含有Npt-Ⅱ选择标记基因.

关键词：甜瓜、蔗糖磷酸合成酶、基因克隆、工程载体

所属期刊栏目：25

分类号：S652(瓜果园艺)

资助基金：山东省农业良种工程项目一蔬菜种质资源创新鲁科农[2004]113号

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：548-551