刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化

摘要：

以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验.结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL 10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2 mmol/L dNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2 U Taq DNA多聚酶.经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用"Touchdown"扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0 mg/L)和Taq DNA多聚酶(3.0 U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础.

关键词：刺梨、近缘种、PCR扩增、实验体系

所属期刊栏目：20

分类号：S685.120.1(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：国家自然科学基金;贵州省自然科学基金

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：35-39