H2 O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量

摘要：

建立一种简单、准确、灵敏度高的测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的荧光分析法.黑色素不发荧光,一旦在强烈的氧化条件下(在碱性过氧化氢中加热)被氧化后就会发出强烈的荧光,通过测量其相对荧光强度来测定细胞中黑色素的含量.利用荧光分光光度计在带宽为5 nm,扫描速度为2400 nm·min-1,扫描间距为1 nm的条件下确定乌骨鸡黑色素的激发波长和发射波长.通过单因素实验筛选浓度范围在10～100μg·m L-1的乌骨鸡黑色素的最佳氧化条件,对该方法的线性范围、检测限、仪器精密度、重复性等结果进行分析评价.向A375细胞(无黑色素的人的黑色素瘤细胞)样品中分别加入25,40和80μg·mL-1黑色素标准品,在最佳氧化条件下进行反应后测定细胞样品中黑色素含量.计算测定值与理论值的相对误差值,意在探究细胞中杂蛋白和脂质对黑色素定量结果的影响;向乌骨鸡黑色素细胞样品中分别加入5.00,7.50和10.00μg的黑色素标准品,按照最佳氧化条件测定其细胞样品中总黑色素含量,并计算其加标回收率.结果表明:乌骨鸡黑色素的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm;乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为:p H为8,氧化温度为55℃,过氧化氢浓度范围为24％ ～26％,氧化时间为2 h;黑色素浓度在10～100μg·m L-1范围内与相对荧光强度呈良好线性关系,相关系数r=0.9974,线性回归方程为b=0.0147 a+0.3138,荧光分析法的方法检出限为0.30μg·mL-1,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg·mL-1;精密度实验的RSD值为1.87％,重复性实验的RSD值为4.59％;在A375细胞中加入不同质量的黑色素标准品后,测量值与理论值的相对误差分别为2.78％,3.53％ 和0.25％;在乌骨鸡黑色素细胞中加入不同黑色素标准品后,测得的加标回收率分别为95.94％,92.14％ 和99.83％,RSD值为4.00％;综上所述,该方法简单、准确、稳定、检测限低,且测定结果不受细胞内杂蛋白以及脂质的干扰,更适用于测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的含量.

关键词：乌骨鸡、黑色素细胞、黑色素含量、荧光分析法

所属期刊栏目：40

分类号：O657.39(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金地区科学基金项目;食品科学与技术国家重点实验室自由探索课题

在线出版日期：2020-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1595-1600