10.3964/j.issn.1000-0593(2014)06-1577-05
快速简便的杂交检测DNA
Southern杂交作为黄金标准,已广泛运用于DNA的检测上。但是,经典的southern杂交和近年来一些DNA检测方法存在放射性污染,操作繁琐,耗时,对实验仪器设备要求高等问题。本文利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP 合成DNA探针建立了快速检测DNA的液相杂交方法。该方法包括探针制备、液相杂交、电泳分离和信号检测四个步骤,并在此基础上对FITC-双链和FITC-单链探针的杂交效果作了比较。结果显示,使用FITC标记的两种探针都能取得良好的实验结果,但单链探针较双链的检测灵敏度高;双链DNA探针可以检测出0.8μg(3.64×10-13 mol)的质粒,而单链DNA探针可以检测出0.38μg(1.82×10-13 mol)的质粒DNA,在检出效率上是前者的2.1倍。整个检测过程操作简便,可在3 h内完成,可较好地解决了其他DNA检测方法存在的费时费力的问题。
液相杂交、FITC-12-dUTP、southern杂交、DNA检测、荧光
Q988(人类学)
FundationNatural Science Foundation of China31070276,31270360
2014-07-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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1577-1581