氮磷比对脂多糖胺/质粒复合物性能的影响
目的 采用新型阳离子共聚物脂多糖胺(lipopolysaccharide-amine,LPSA)与质粒构建脂多糖胺/质粒复合物(LPSA/pDNA),探究其理化性能随氮磷比(N/P)变化规律.方法 构建含骨形态生成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的非融合的真核表达质粒并鉴定.配置不同N/P的LPSA/pDNA复合物,凝胶阻滞实验探究LPSA与pDNA结合能力;动态光散射仪检测其粒径及zeta电位;透射电镜及原子力显微镜下观察LPSA/pDNA复合物形态;探究LPSA/pDNA复合物耐酶解能力随时间的变化规律.结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,真核表达载体BMP2编码序列片段与Genebank 一致.随着N/P增加,LPSA/pD-NA 阻滞质粒DNA能力增加;当N/P＞10时,LPSA可基本阻滞pDNA.LPSA/pDNA复合物的粒径随着N/P的增加先减小后增大,当N/P＞3时,LPSA/pDNA粒径＜150 nm;当N/P为12～25时,LPSA/pDNA粒径稳定于65 nm左右,LPSA/pDNA表面zeta电位呈正电性,电荷值为9～35 mV.当N/P为60时,随着DNase I处理时间增加,4 h内琼脂糖凝胶电泳条带亮度无明显变化,6 h时琼脂糖凝胶电泳条带亮度稍微减弱.结论 N/P为12～25时,LPSA与pDNA形成直径约65 nm的阳离子复合物纳米囊泡.N/P为60时,LPSA可有效结合pDNA,LPSA/pDNA 在 4 h 内,耐 DNase Ⅰ酶解.
脂质体转染、骨形态生成蛋白2、脂质体、胆固醇、海藻酸钠
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R914.5;R783.1(药物基础科学)
广东省基础与应用基础研究基金项目2021A1515011480
2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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