沉默CENP－N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响
目的 探究着丝粒蛋白－N(CENP－N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制.方法 利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP－N 基因在503例胃癌组织和125 例癌旁组织中的表达水平;以收集的143 例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU－1、HS－746T、AGS、MGC－803 及人胃黏膜细胞GES1 为研究对象,qRT－PCR法检测CENP－N mRNA水平,Western blot检测CENP－N蛋白表达;体外培养胃癌SNU－1 细胞株,分为空白对照组、siRNA－NC组(阴性对照组)、CENP－N －siRNA组(沉默 CENP－N 表达组)、通路激活剂组(CENP－N －siRNA +740Y－P组).qRT－PCR法检测CENP－N mRNA水平;CCK－8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤－2(Bcl－2)、Bcl－2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3－激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况.结果 利用GEPIA网站发现 CENP －N mRNA 在胃癌组织、癌旁组织中的表达分别为4. 25 ±0. 36、1. 45 ±0. 21 ,差异有统计学意义(P＜0. 05);与癌旁组织比较,胃癌组织中CENP－N mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P＜0. 05);与GES1 细胞比较,CENP－N mRNA在胃癌SNU－1 、HS－746T、AGS、MGC－803细胞中的表达水平显著升高,且CENP－N mRNA在SNU－1 细胞中的表达水平最高,因此,选择SNU－1 细胞进行后续实验研究.细胞成功转染;与空白对照组、siRNA－NC组比较,CENP－N－siRNA组SNU－1 细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P＜0. 05 ),PCNA、Bcl －2、p －PI3K/PI3K、p －AKT/AKT、p －mTOR/mTOR表达显著降低(P＜0. 05);与CENP－N－siRNA组比较,通路激活剂组SNU－1 细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P＜0. 05),PCNA、Bcl－2、p－PI3K/PI3K、p－AKT/AKT、p－mTOR/mTOR表达显著升高(P＜0. 05).结论 沉默CENP－N表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的.
着丝粒蛋白-N、胃癌、磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路、增殖、凋亡
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R735.2;R73-3(肿瘤学)
辽宁省自然科学基金2019－MS－187
2022-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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