氧化苦参碱调控FOXO1表达对TNF-α诱导HaCaT细胞炎症因子分泌的影响
目的 探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响.方法 细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间.将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25 μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25 μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25 μg/LTNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25 μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平.结果 本研究采用25 μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞.与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP 组 HaCaT 细胞 FOXO1 mRNA 表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β 含量以及 TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1 蛋白表达和 AKT 磷酸化水平显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).结论 氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖.
氧化苦参碱、叉头框转录因子O亚族1、肿瘤坏死因子、HaCaT细胞、炎症因子
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R758.63;R751.05(皮肤病学与性病学)
宁夏自然科学基金项目2018AAC03259
2022-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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