miR-31调控人角膜缘干细胞自我更新和分化的机制研究

摘要：

目的 探讨microRNA-31(miR-31)对在胚胎干细胞微环境中培养的角膜缘干细胞(LSCs)自我更新与分化的调控作用.方法 采用CnT-20,添加20％胚胎干细胞培养上清液(ESC-C M),对LSCs进行培养.将ESC-CM组细胞进行转染miR-31或者Antago-31,检测细胞克隆形成能力的改变;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡的改变,qPCR检测FIH-1、P21、P63、ABCG2、CK3、miR-31、miR-143、miR-145、miR-184的表达情况;免疫荧光与Western blot检测CK3、Cx43 P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、P21、Caspase-3等的表达情况.结果 miR-31 mimic组细胞的CFE明显低于miR-31 inhibitor组[(3.00±1.00)％ vs.(6.90±0.79％),P＜0.05];Antago-31组细胞的CFE[(8.90±0.53)％ vs.(7.27±0.80),P＜0.05]则显著高于Ir-antago组.miR-31mimic组进入S期细胞的比例[(9.33±2.88)％ vs.(16.00±1.73)％,P＜0.05]明显低于miR-31 inhibitor组;Antago-31组进入S期细胞的比例[(22.33±2.58)％ vs(15.33±0.58)％,P＜0.05]则显著高于Ir-antago组.miR-31mimic 组细胞凋亡的比例[(31.13±7.56)％ vs.(4.83±0.38％),P＜0.05]明显高于miR-31 inhibitor组;Antago-31组细胞凋亡的比例[(3.03±0.23)％vs.(5.93±1.53％),P＜0.05]则显著低于Ir-antago组.在进行miR-31 mimc 处理之后,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量下降,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显上升(P＜0.05).在antago-31处理组,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量上升,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显下降(P＜0.05).Caspase-3的表达水平在antago-31处理组一直维持在相对较低的水平.结论通过转染Antago-31提高了FIH-1在LSCs中的表达水平,并减少了P21的表达.miR-31表达水平的下调促进了LSCs干性的维持.ESC-CM通过抑制miR-31/FIH-1/P21部分调控了LSCs的更新与分化.

关键词：人角膜缘干细胞、microRNAs、胚胎干细胞、微环境

所属期刊栏目：38

分类号：R77;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目81300732;广东省自然科学基金资助项目2014A030313487,2015A030313479

在线出版日期：2017-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1164-1169