慢病毒载体介导的 shRNA 沉默非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A 对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响
目的：观察慢病毒介导 shRNA 沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA（MYH9）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含 MYH9干扰序列的 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro（实验组）质粒转染到293T 细胞，以转染 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro 空载质粒的细胞为空载组，以正常未转染细胞为对照组，包装产生的病毒液感染 BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达；以β－actin 为内参，分别用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT －PCR）和免疫印迹（Western blot）检测 MYH9 mRNA 及蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其培养基上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、促血管生成素1（ANG －1）和促血管生成素2（ANG －2）的含量。结果成功构建重组质粒 pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro，转染293 T 细胞产生高滴度慢病毒，荧光显微镜下可见被慢病毒感染的 rBMSCs 表达强绿色荧光蛋白，qRT －PCR 和 Western blot结果显示2条慢病毒感染 MYH9 mRNA 表达水平明显下调，显著低于对照组和空载组（P ＜0．05）；沉默 MYH9基因后，实验组的 ANG －1和 bFGF 在增殖末期较对照组和空载组有明显上升（P ＜0．05），ANG －2和 VEGF 未见明显差异（P ＞0．05）。结论pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro 慢病毒包装质粒转染 BMSCs 后，BMSCs 旁分泌能力未受明显影响。
非肌肉肌球蛋白重链ⅡA、骨髓间充质细胞、慢病毒、旁分泌
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S85;R73
国家自然科学基金资助项目编号81360292
2016-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
2377-2383
