高迁移率族蛋白 B1对内皮细胞通透性的影响
目的：研究高迁移率族蛋白B1（ HMGB1）对内皮细胞通透性的影响，以及HMGB1受体（ RAGE）和p38 MAPK通路在此病理过程中的作用。方法 HMGB1（200 ng／mL）与人脐静脉内皮细胞株分别在体外共同培养0、3、6、12和24 h，以0 h为对照检测HMGB1诱导单层内皮细胞通透性Pd改变的时间效应；用电阻法分别在0、3、6、12和24 h测量正常空白对照组（单纯培养基）和HMGB1组（200 ng／mL）的单层内皮细胞电阻值TER，比较两组间在相同时间点电阻值的差别；p38 MAPK抑制剂SB203580（25μmol／L）预先作用1 h，继以HMGB1（200 ng／mL）作用12h，比较不同组间细胞通透性的变化；以HMGB1（200 ng／mL）分别作用0、10、20、30、60 min后观察细胞内p38蛋白表达及磷酸化p38表达的时间效应；转染siRNA下调RAGE表达，或以原代培养野生型和RAGE（－／－）小鼠肺微血管内皮细胞培并继以HMGB1刺激，比较各组细胞内磷酸化p38蛋白表达的变化。通透性检测采用FITC荧光标记右旋糖酐漏出法及跨内皮电阻（ TER）测定法，蛋白表达用免疫印迹法检测。结果 HMGB1以时间依赖的方式引起单层内皮细胞通透性Pd的升高，12 h与0 h相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）；且可使跨细胞电阻TER降低，在12 h与空白对照组相应时间点相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）；也可引发p38蛋白磷酸化水平的升高，与0 min相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）；SB203580预处理再以HMGB1刺激后细胞通透性明显降低，与HMGB1单纯刺激组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；RAGE siRNA转染后以HMGB1刺激细胞p38磷酸化水平显著下调，与HMGB1组相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）；HMGB1刺激野生型小鼠PMVECs可诱导p38磷酸化，而RAGE（－／－）小鼠PMVECs则无此效应（ P＜0.05）。结论 HMGB1通过结合RAGE来激活p38诱导血管内皮细胞通透性的增高。
高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体、小鼠肺微血管内皮细胞、内皮细胞通透性、p38 MAPK
R44;H31
国家自然科学基金资助项目编号31300950;教育部2012年高等学校博士学科点专项科研基金联合资助课题编号20124433120011
2015-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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