硫普罗宁对乙醇所致IMR－32人神经母细胞瘤细胞氧化损伤的作用机制

摘要：

目的：探讨乙醇所致IMR－32人神经母细胞瘤细胞氧化损伤的作用机制，以及硫普罗宁对其诱导的氧化损伤的影响。方法实验设置对照组（不加药）、乙醇小剂量（200 mmol／L）组、中剂量（400 mmol／L）组、大剂量（800 mmol／L）组，选取中剂量组同时加入不同浓度的CYP2E1特异性抑制剂二烯丙基硫醚（1、4、8 mmol／L），或不同浓度的硫普罗宁（0.02、0.2、2 mmol／L），分别处理细胞24 h。采用生化方法检测乳酸脱氢酶（ LDH）、超氧化物歧化酶（SOD），共聚焦显微镜检测活性氧（ROS）和线粒体膜电位，免疫荧光检测CYP2E1蛋白，Western blot检测总ERK1／2蛋白水平和磷酸化水平。结果经过低、中、高剂量乙醇处理后， LDH活力分别较对照组升高， SOD活力下降。与中剂量组比较，加入低、中、高剂量二丙烯基硫醚抑制剂，LDH活力降低，且SOD活力升高；合用低、中、高剂量硫普罗宁后，LDH活力分别降低，且SOD活力升高。与对照组相比，经过低、中、高剂量的二丙烯基硫醚和硫普罗宁单独处理，细胞培养基LDH活力和SOD活力均没有变化（ P＞0.05）。低、中、高剂量乙醇处理组CYP2E1蛋白水平较对照组升高，0.2 mmol／L硫普罗宁合用400 mmol／L乙醇降低CYP2E1的表达7％（ P＜0.01）。经过低、中、高剂量乙醇处理后，ROS生成量较对照组升高。与乙醇（400 mmol／L）组比较，加入低、中、高剂量二丙烯基硫醚抑制剂后，ROS含量下降；加入低、中、高剂量硫普罗宁，ROS含量下降。经过低、中、高剂量乙醇处理后，线粒体膜电位荧光强度较对照组升高。与乙醇（400 mmol／L）组比较，加入低、中、高剂量二丙烯基硫醚抑制剂后，线粒体膜电位荧光降低；加入低、中、高剂量硫普罗宁，线粒体膜电位荧光降低。低、中、高剂量乙醇处理组ERK蛋白总量不变，p－ERK蛋白表达下降。与乙醇（400 mmol／L）组比较，4 mmol／L二丙烯基硫醚增加p－ERK1／2蛋白量32％（P＜0.01）；0.2 mmol／L硫普罗宁增加p－ERK1／2蛋白量33％（P＜0.01）。结论乙醇可通过诱导CYP2E1表达，使得ROS生成量增加，并下调磷酸化ERK1／2蛋白，降低线粒体膜电位，导致神经细胞损伤；CYP2E1抑制剂二丙烯基硫醚和硫普罗宁可抑制CYP2E1表达或抑制其活性，有效减少ROS产生，上调ERK1／2蛋白磷酸化水平，稳定线粒体，保护乙醇损伤的神经细胞。

关键词：乙醇、神经细胞、细胞色素P4502E1、自由基、硫普罗宁

分类号：R73;TS2

在线出版日期：2015-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1846-1849,1850