靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的：构建介导 RECQL4 RNA 干扰的 shRNA 慢病毒表达载体。方法将人工合成的 RECQL4 siR－NA 经 PCR 扩增后与线化的 pLKO．1慢病毒表达载体连接，经测序鉴定后，将 pLKO．1－RECQL4－shRNA 与慢病毒包装质粒共转染入 HEK －293T 细胞，产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞 RKO 后，实时定量 PCR 和 Western blot 检测 RECQL4 mRNA 和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的 RKO 细胞为未感染组，感染 pLKO．1－scramble －shRNA 慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建 pL－KO．1－RECQL4－shRNA 慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107 IU／mL。感染 RKO 细胞后，RECQL4的 mRNA 和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体，可有效抑制人结肠癌 RKO 细胞 RECQL4 mRNA 和蛋白的表达。
慢病毒表达载体、RECQL4、shRNA、结肠癌
R37;S85
广东省科技计划项目编号2010B031500009;高等学校博士学科点专项科研基金资助项目编号2011017110075
2015-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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